生化試劑: 伊勢久源葉 Santa 博邁德亞科因 ?Proteintech/武漢三鷹陶術(shù) 索萊寶普利萊美天旎麥克林阿拉丁 OXOID Elabscience DSHB 伯樂 Peprotech Progen Polyplus Rockland Streck Sigma-Aldrich Serumwerk Bernburg AG Stressmarq SurModics Sangon Biotech SBA TBD TAKARA The Well Vector Laboratories U-CyTech WAKO Yakult 安度斯碧云天梅里埃API AnaSpec Abcam Absolute Antibody ADI Bethyl Biowest Borer Bovogen CLARK CellArtis Cayman Cedarlane Diagenode EliteCell Epigentek Fitzgerald Gemini Gibco Hyclone Hospira StemCell Hamilton Helios IBA Irvine ICT Keygen Logos Lucigen AppliChem Atlas antibodies Avidity LONZA龍沙 Luminex Mettler/梅特勒托利多 Mirus MoBio MP Biomedicals Mesalabs MabTech Nordic-MUbio Nanoprobes NanoTag nanoComposix 源培櫻花義翹神州 OMEGA promega Zymo Research 四季青中國臺灣旭基天根同仁化學(xué) 中杉金橋

儀器耗材: 碩華 BTX 科進(jìn) 光明 Nexcelom 思拓凡 Thermo 賽默飛 PALL Qiagen 全式金瑞誠 Roche RAININ Selleck ScyTek ScienCell SPL life sciences Supelco STEMCELL Technologies Whatman Waters 安捷倫Agilent 杭州華安麥迪康 Abmole Alpco AAT Bioquest Bio-Rad/伯樂 Biomiga Amcor Beckman BYSH 白雲(yún)三和 Brand普蘭德 Biologix巴羅克 BD Cellvis Cygnus Cleaver Clontech Corning康寧 Crystal Chem Schott/德國肖特 DLAB/大龍儀器 Epredia (艾普迪) Exalpha Eppendorf艾本德 Fisherbrand Fermentas Falcon GEB Hampton Research HAUSSER IBL-America INCYTO IKA Kimberly 金佰利 Kimble 徠卡雷弗 axygen Marienfeld Milenia Biotec MerckMillipore Normax Nissan Chemical Corporation NEST OriGen 日本羽毛 Watson 世泰寶予德BIO-DL

賴氨酸(lysine，Lys)含量測定試劑盒-說明書

時間：2025/1/10閱讀：1702

賴氨酸(lysine，Lys)含量測定試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

賴氨酸是人體必需氨基酸之一，能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能，并有提高中樞神經(jīng)組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低，且在加工過程中易被破壞而缺乏，故稱為第一限制性氨基酸。

測定原理：

蛋白質(zhì)中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2，它與茚三酮試劑反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關(guān)系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，而且僅有—個游離氨基(ε-NH2)，所以通常用亮氨酸配制標(biāo)準(zhǔn)液。

組成：

產(chǎn)品名稱	BH6010-100T/96S	Storage
提取液：液體	100ml	4℃
試劑一：粉劑	1 瓶	4℃
試劑二：液體	12.5ml	4℃
試劑三：液體	15ml	4℃
試劑四：60%乙醇（自備）	1 瓶	4℃
說明書	1 份

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。

賴氨酸提取：

樣本烘干粉碎，稱取約 0.01g 樣本，加入 1ml 提取液，充分勻漿。80℃水浴提取 20min，冷卻后 10000g

離心 10min，取上清待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 570nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液的配制：取 10ml 試劑一與 10ml 試劑二混合搖勻，取上清備用。用不完的試劑 4℃保存。

3、在有蓋EP 管中加入下列試劑：

試劑名稱（μl）	測定管	空白管
樣本	100
提取液		100
工作液	200	200

混勻，80℃水浴 30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至常溫。

試劑四

300

混勻，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，于 530nm 波長處記錄吸光值A。△A=A 測定管-A 空白管。空白管只要做一管。

賴氨酸含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 0.0062x - 0.0212；x 為賴氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。

1. 按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

賴氨酸含量(µg/g 干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=185.73×(△A+0.0212) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1ml；V2：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml； W：樣本質(zhì)量，g；1.1515，校正系數(shù)。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 0.0031x - 0.0212；x 為賴氨酸含量（µg/ml），y 為吸光值。

1. 按照蛋白濃度計算

賴氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

賴氨酸含量(µg/g 干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515

=371.45×(△A+0.0212) ÷W