產品分類品牌分類

生化試劑: 伊勢久源葉 Santa 博邁德亞科因 ?Proteintech/武漢三鷹陶術索萊寶普利萊美天旎麥克林阿拉丁 OXOID Elabscience DSHB 伯樂 Peprotech Progen Polyplus Rockland Streck Sigma-Aldrich Serumwerk Bernburg AG Stressmarq SurModics Sangon Biotech SBA TBD TAKARA The Well Vector Laboratories U-CyTech WAKO Yakult 安度斯碧云天梅里埃API AnaSpec Abcam Absolute Antibody ADI Bethyl Biowest Borer Bovogen CLARK CellArtis Cayman Cedarlane Diagenode EliteCell Epigentek Fitzgerald Gemini Gibco Hyclone Hospira StemCell Hamilton Helios IBA Irvine ICT Keygen Logos Lucigen AppliChem Atlas antibodies Avidity LONZA龍沙 Luminex Mettler/梅特勒托利多 Mirus MoBio MP Biomedicals Mesalabs MabTech Nordic-MUbio Nanoprobes NanoTag nanoComposix 源培櫻花義翹神州 OMEGA promega Zymo Research 四季青中國臺灣旭基天根同仁化學中杉金橋

儀器耗材: 碩華 BTX 科進光明 Nexcelom 思拓凡 Thermo 賽默飛 PALL Qiagen 全式金瑞誠 Roche RAININ Selleck ScyTek ScienCell SPL life sciences Supelco STEMCELL Technologies Whatman Waters 安捷倫Agilent 杭州華安麥迪康 Abmole Alpco AAT Bioquest Bio-Rad/伯樂 Biomiga Amcor Beckman BYSH 白雲三和 Brand普蘭德 Biologix巴羅克 BD Cellvis Cygnus Cleaver Clontech Corning康寧 Crystal Chem Schott/德國肖特 DLAB/大龍儀器 Epredia (艾普迪) Exalpha Eppendorf艾本德 Fisherbrand Fermentas Falcon GEB Hampton Research HAUSSER IBL-America INCYTO IKA Kimberly 金佰利 Kimble 徠卡雷弗 axygen Marienfeld Milenia Biotec MerckMillipore Normax Nissan Chemical Corporation NEST OriGen 日本羽毛 Watson 世泰寶予德BIO-DL

吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）試劑盒

時間：2025/1/8閱讀：1364

吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

脯氨酸是植物體內適應逆境脅迫的一種重要的滲透調節物質。高等植物中脯氨酸代謝因其初始底物不同，分為谷氨酸( Glu) 和鳥氨酸( Orn) 兩條合成途徑。

吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS，Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase）是以谷氨酸為前體合成脯氨酸途徑的關鍵酶，對植物適應逆境脅迫起關鍵作用。

測定原理：

吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷氨酸生成 P5C 過程中分解ATP 生成ADP 和無機磷，通過鉬酸銨比色法測定單位時間內產生無機磷的量可確定P5CS 活性。

組成：

產品名稱	BH6017-50T/24S	Storage
試劑一：液體	60ml	4℃
試劑二：液體	6ml	4℃
試劑三：液體	6ml	4℃
試劑四：粉劑	1 瓶	4℃
試劑五：粉劑	1 瓶	4℃
試劑六：液體	25ml	RT
試劑七：10mmol/L 標準磷貯備液	10ml	4℃
說明書	1 份

試劑四用時加入 25 ml 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周；試劑五用時加入 25 ml 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周；

0.5μmol/ml 標準磷應用液配制：

將試劑七 20 倍稀釋，即取 0.1ml 試劑七加 1.9ml 蒸餾水充分混勻。

定磷劑的配制：

按H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現用現配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

自備儀器和用品：

可見外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣品酶液的制備：

1、組織樣品：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入

1ml 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

操作步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 660nm。

2、酶促反應（在EP 管中加入下列試劑）

	對照管	測定管
試劑二（μl）		100
樣本（μl）		100

混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）準確水浴 10min

試劑三（μl）	100	100
試劑二（μl）	100
樣本（μl）	100

混勻，8000g，25℃離心 10min，取上清液

3、定磷（在EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）

	空白管	標準管	對照管	測定管
0.5μmol/ml 標準磷應用液（μl）		100
上清液（μl）			100	100
蒸餾水（μl）	100
定磷試劑（μl）	1000	1000	1000	1000

混勻，室溫放置 30min，在 660nm 處，記錄各管吸光值。

注意：

1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒 50 管保證測 24 份P5CS 活性。

2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。

3、空白管和標準管只要做一管。每個測定管設一個對照管。

計算

1、血清（漿）P5CS 活力的計算:

單位定義：每小時每毫升血清（漿）中P5CS 消耗ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。

P5CS 活力（μmol/h/ml）=C 標準管×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）×V 總÷V 樣÷T=9

×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）

2、組織中P5CS 活力的計算：

（1）按蛋白濃度計算：

單位定義：每小時每毫克組織蛋白中 P5CS 消耗ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。

P5CS 活力(μmol/h /mg prot)=C 標準管×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）×V 總÷（Cpr×V樣）÷T =9 ×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位定義：每小時每克組織中 P5CS 消耗ATP 產生 1μmol 無機磷的量為一個酶活力單位。

P5CS 活力(μmol/h /g 鮮重)=C 標準管×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）×V 總÷(W× V

樣÷V 樣總)÷T=9 ×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標準管-A 空白管）÷W

C 標準管：標準管濃度，0.5μmol/ml；V 總：酶促反應總體積，0.3ml；V 樣：加入樣本體積，0.1ml ； V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，1/6 小時；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重， g。